为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢

来源：学生作业帮编辑：搜狗做题网作业帮分类：综合作业时间：2024/08/08 05:07:30

为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢
我用蓝白斑做的 T载体和目的片段连,为什么篮斑的做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢?

1 如果你用了目的片断特异的引物,那么可能是你连接时加的目的片断过多,菌表面粘附了目的片段（我曾经在没有斑的地方蘸一下,也能P出目的带）,这样验证阳性克隆时建议你
1〉用T-vector两端的测序引物（如M13F+R）,做个PCR,看能否扩出目的大小的带,如果有,说明肯定有片断连入T载体；如果能用一个测序引物和一个你自己的引物扩增就更好了,不但可以确定插入的方向还可以肯定是你的片断插入.
2〉如果你没有这些引物,可以抽出质粒后,用你的特异引物,进行较少循环数的扩增,如果能拿到很亮的带,那么很可能是阳性；因为提质粒后蘸附的片断会很少,而质粒作模板有利于目的基因的克隆；当然你也可以酶切验证.
2 有些片断较短,插入后并没有导致LacZ的移码,仍然会显出蓝色,所以有时蓝色不一定 ,没有目的片断插入,特别是当满板都是淡蓝时.

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