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PCR 中AmpErase UNG Activation 50℃ 2min的目的是什么

来源:学生作业帮 编辑:搜狗做题网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/06/28 03:36:24
PCR 中AmpErase UNG Activation 50℃ 2min的目的是什么
PCR 中AmpErase UNG Activation 50℃ 2min的目的是什么
尿嘧啶-N- 糖基化酶(UNG)酶
  原理:UNG酶的作用原理是选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键,形成的有缺失碱基的DNA链,在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂,从而被消除.UNG酶的最佳活性温度为50℃,95℃灭活.
  作用:为保证PCR结果的准确性,要预防非特异性PCR扩增和污染.常用的措施是使用UNG酶(Uracil-N-Glycosylase)和Taq酶热启动.PCR反应最常见, 最重要的污染物是PCR产物,防污染热启动PCR试剂盒以dUTP取代dTTP,所以PCR产物都是含有dU的DNA链.在PCR开始前增加50℃的保温步骤,UNG酶即可将反应体系中已有的U-DNA污染物中的尿嘧啶碱基降解,并在随后变性这步的条件下DNA链断裂,消除由于污染DNA产生的扩增,从而保证扩增结果的特异性,准确性.同时UNG酶被灭活,不会再降解新扩增的产物U-DNA.
  高品质的UNG酶可以消除高达108的U-DNA产物,和热启动Taq酶一同用于建立含有UNG/dUTP防污染体系的热启动PCR反应系统.