【求助/交流】目的基因与表达载体连接时有哪些要点?
来源:学生作业帮 编辑:搜狗做题网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/08/19 06:17:10
【求助/交流】目的基因与表达载体连接时有哪些要点?
![【求助/交流】目的基因与表达载体连接时有哪些要点?](/uploads/image/z/18581115-3-5.jpg?t=%E3%80%90%E6%B1%82%E5%8A%A9%2F%E4%BA%A4%E6%B5%81%E3%80%91%E7%9B%AE%E7%9A%84%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E4%B8%8E%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E8%BD%BD%E4%BD%93%E8%BF%9E%E6%8E%A5%E6%97%B6%E6%9C%89%E5%93%AA%E4%BA%9B%E8%A6%81%E7%82%B9%3F)
2.片段和载体酶且要完全,确定大小没问题
不过有些载体本身就很很难连接!
建议在连接时,先加入载体和目的基因,85度热浴15min,除去残留的酶和未纯化干净的杂蛋白.然后再加入酶和BUFFER.
适当延长连接时间24小时以内都没问题的!
如果还是不行,就试试对载体去磷酸化,每一步处理都要在结束后热变性,失活残留的酶,适当加大目的基因的量(10以内),连接温度也可以在4-16度内用PCR做个梯度!不过如果有平末端的,就不用做这个梯度了.dfdxhghg(站内联系TA)我们只做医学论文,所以更专业!我们全部的工作人员均来自医学院校和附属医院,全部拥有硕士以上学历,有丰富的论文写作经验.做医学论文,我们有比其他公司无法比拟的优势!很多论文公司的人员根本不懂医学,医学论文等专业知识上面很难沟通和探讨.
不过有些载体本身就很很难连接!
建议在连接时,先加入载体和目的基因,85度热浴15min,除去残留的酶和未纯化干净的杂蛋白.然后再加入酶和BUFFER.
适当延长连接时间24小时以内都没问题的!
如果还是不行,就试试对载体去磷酸化,每一步处理都要在结束后热变性,失活残留的酶,适当加大目的基因的量(10以内),连接温度也可以在4-16度内用PCR做个梯度!不过如果有平末端的,就不用做这个梯度了.dfdxhghg(站内联系TA)我们只做医学论文,所以更专业!我们全部的工作人员均来自医学院校和附属医院,全部拥有硕士以上学历,有丰富的论文写作经验.做医学论文,我们有比其他公司无法比拟的优势!很多论文公司的人员根本不懂医学,医学论文等专业知识上面很难沟通和探讨.
目的基因与载体的体外连接.为什么目的基因要比载体多些?
目的基因片段与载体DNA连接的主要有?
目的基因导入受体细胞是怎样进行的?如何防止目的基因与质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接?请
将目的基因与载体连接起来基因操作应用哪种酶?
基因表达载体中目的作用是什么?
基因表达载体的构建与将目的基因导入受体细胞的区别?
目的基因片段与载体DNA连接的主要形式呢?
DNA连接酶把目的基因与载体的黏性末端的碱基对连接起来,
载体抗性基因有助于促进目的基因表达?
基因载体与基因表达载体的区别?
目的基因不能表达的原因有哪些?比如,载体没有进入,还有什么?
基因工程中的逆转录病毒做载体时,逆转录病毒是RNA病毒,如何与目的基因结合?构建表达载体?