关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗?
来源:学生作业帮 编辑:搜狗做题网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/07/23 06:00:39
关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗?
在基因诊断时,已知致病基因序列设计的引物也能同时扩增正常人该段基因吗.比如镰状细胞病是点突变,患者和正常人在突变点两侧的基因是一样的,那么根据在突变两侧的引物扩增的片段在患者和正常人应该是有所不同的,一个有突变,一个没有,但这不就成了同一对引物扩增不同的基因了?非常困惑,谁能帮忙解释一下!
在基因诊断时,已知致病基因序列设计的引物也能同时扩增正常人该段基因吗.比如镰状细胞病是点突变,患者和正常人在突变点两侧的基因是一样的,那么根据在突变两侧的引物扩增的片段在患者和正常人应该是有所不同的,一个有突变,一个没有,但这不就成了同一对引物扩增不同的基因了?非常困惑,谁能帮忙解释一下!
你的理解是正确的.PCR扩增产物完全取决于引物的序列和位置.
对于你说的那个点突变的情况,有不少方法可以加以区别:比如
1.PCR扩增后,产物可以测序.也可以酶切.有些点突变可以导致酶切位点的丧失.这样就可以判断是否有突变
2.针对点突变或者基因多样性,还可以进行探针荧光实时PCR.引物还是在位点的两侧,但是针对不同的目标核苷酸,探针的序列不一样.不同的探针上标记的荧光也不一样.这样,PCR时,不同序列在反应中测得的荧光也不一样,就可以知道各个序列的比例数量了.
再问: 谢谢,突变的鉴别我知道。只是对这种情况下引物设计有些疑问,是针对致病基因设计还是正常人的这段基因设计,理论上,因为两者在突变两侧的序列一样,那引物也可以一样。但实际中若针对这两段不同基因进行设计,比如在NCBI等检索查找,是否也得到同样的引物呢。那么能否说:同一对引物可以扩增出不同基因;不同引物也可以扩增出相同基因?那这不是跟引物具有特异性,基因都有特定引物相矛盾?
再答: 你的概念不是很清楚啊 就算发生了突变,还是那个基因啊。只要不是在引物所在区域,那PCR做出来肯定是同一个区域啊。突变点在中间, 即扩增产物上 但是, 如果在设计引物的时候,把其中一个引物的3’端正好落在突变点,那PCR就不会成功了。
对于你说的那个点突变的情况,有不少方法可以加以区别:比如
1.PCR扩增后,产物可以测序.也可以酶切.有些点突变可以导致酶切位点的丧失.这样就可以判断是否有突变
2.针对点突变或者基因多样性,还可以进行探针荧光实时PCR.引物还是在位点的两侧,但是针对不同的目标核苷酸,探针的序列不一样.不同的探针上标记的荧光也不一样.这样,PCR时,不同序列在反应中测得的荧光也不一样,就可以知道各个序列的比例数量了.
再问: 谢谢,突变的鉴别我知道。只是对这种情况下引物设计有些疑问,是针对致病基因设计还是正常人的这段基因设计,理论上,因为两者在突变两侧的序列一样,那引物也可以一样。但实际中若针对这两段不同基因进行设计,比如在NCBI等检索查找,是否也得到同样的引物呢。那么能否说:同一对引物可以扩增出不同基因;不同引物也可以扩增出相同基因?那这不是跟引物具有特异性,基因都有特定引物相矛盾?
再答: 你的概念不是很清楚啊 就算发生了突变,还是那个基因啊。只要不是在引物所在区域,那PCR做出来肯定是同一个区域啊。突变点在中间, 即扩增产物上 但是, 如果在设计引物的时候,把其中一个引物的3’端正好落在突变点,那PCR就不会成功了。
关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗
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