双酶切连接后转化,长出了菌落,但提质粒跑电泳,分子量比目的质粒大很多,为什么

为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急 最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒 根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌. 甘油20%保甘油菌,提质粒,一直OK,但这几天发现培养菌后,菌量很多,但抽提无质粒,抗性也加了,求指教 限制行内切酶切割质粒和目的基因后,目的基因是怎么和质粒连接的? 质粒和目的基因片段分别双酶切（bamh1,xba1）连接后电转感受态细胞,同时将质粒酶切回收的片段转化做对照 质粒与目的基因连接得到几种重组质粒 怎样鉴定大肠杆菌质粒转化后获得的菌落是否为阳性? 如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切? 提取的质粒跑电泳出来带很杂,目的片段1700bp,用的是pMD19—T载体,从左往右第三泳道和第九泳道是空质粒 转化了的质粒的细菌为什么要恢复培养 转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带.