博凌科为的pSURE -T Simple 载体连接试剂盒稳定性怎么样?求说明
来源:学生作业帮 编辑:搜狗做题网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/07/13 19:39:06
博凌科为的pSURE -T Simple 载体连接试剂盒稳定性怎么样?求说明
pSURE-T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体.这种载体是由pUC19载体改建而成,和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同,pSURE-T Simple 通过改造pUC19,在原pUC19多克隆位点引入 Xcm I酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基,因此有更高的重组效率.同时它消除了pUC19载体上的多克隆酶切位点,克隆后的 PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点.此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时,酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率.这种载体尽管消除了LacZ基因上的多克隆酶切位点,但不影响b-半乳糖苷酶的正常表达,因此,PCR产物克隆后仍可以利用a-互补性进行蓝白菌落的筛选, 挑选阳性克隆.由于这种载体是以pUC19载体为基础构建而成,所以它们具有同pUC19载体相同的功能.可以用M13通用引物进行测序(不可用T7通用引物测序,因为T7已经消除了).
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