如何使基因在原核生物中表达
来源:学生作业帮 编辑:搜狗做题网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/07/05 01:23:22
如何使基因在原核生物中表达
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1.获取目的基因:最简单的是直接从cDNA文库找,不然就要自己用mRNA逆转录出cDNA,然后PCR,电泳检测,回收.
2.酶切和连接:找一个质粒载体,根据载体的说明书选择内切酶,一般是双酶切.把载体和你的目的片段用一样的酶切了,然后混合了连接.
3、转化:找一种工程菌,把它弄成感受态,把你连接好了的重组质粒和菌混了,让质粒钻到菌里面去.
4、检验(筛选培养):看看质粒进到菌里面没有,目的基因连接到了质粒上了没有,一般是蓝白斑+抗生素抗性+电泳.
5、诱导表达:加入诱导剂,等着菌表达
6、检测,看看产物出来没有,量多少、有没有活性,etc.
完了,具体问题具体分析,思路以上.
2.酶切和连接:找一个质粒载体,根据载体的说明书选择内切酶,一般是双酶切.把载体和你的目的片段用一样的酶切了,然后混合了连接.
3、转化:找一种工程菌,把它弄成感受态,把你连接好了的重组质粒和菌混了,让质粒钻到菌里面去.
4、检验(筛选培养):看看质粒进到菌里面没有,目的基因连接到了质粒上了没有,一般是蓝白斑+抗生素抗性+电泳.
5、诱导表达:加入诱导剂,等着菌表达
6、检测,看看产物出来没有,量多少、有没有活性,etc.
完了,具体问题具体分析,思路以上.