有目的基因,293t细胞,如何用慢病毒载体整合入293t细胞,

来源：学生作业帮编辑：搜狗做题网作业帮分类：生物作业时间：2024/08/10 09:19:21

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例)：
第一天：
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天：\x09\x09\x09
1.转染293FT细胞.
1.500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2.500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3.5min后,将,溶液混合,室温静止30min\x09
4.从6孔板中吸出1ml培养基,然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物.
2.6-10h后,移除含有DNA-脂质体复合物的培养基,代之以正常培养液DMED+
10%FBS（从此刻开始算时间）.
第三天：
3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上
第四天：
4.48h收获含病毒的上清,0.45um滤膜过滤,同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4.感染细胞：用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞.
第五天：
5.72h后再次收获病毒上清.将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞.
6.一般感染48h后,就能见到明显的荧光.
再问： 2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G 这是什么东西？你的内容是包装试剂盒说明书上的吧，我要自己包装，但很多试剂我没有，比如Opti-MEM 脂质体2000

腺相关病毒载体携带目的基因转染细胞,目的基因整合到宿主细胞DNA上,为什么可以持续表达? 大家好,我现在做细胞实验开始需要构建目的基因的过表达,不知道应该选用慢病毒载体还是腺病毒载体,标书载体是如何将目的基因整合到宿主细胞的DNA里去如何用标记基因筛选含有目的基因的细胞基因工程中载体、目的基因、受体细胞有什么区别? 病毒作为载体是如何携带目的基因进入受体细胞? 将目的基因导入动物细胞用到的载体只能是病毒吗?质粒可以吗? 基因表达载体上会哪些基因会被整合到受体细胞的染色体上,是只有目的基因还是整个? 质粒载体携带的目的基因怎样整合到受体细胞上的染色体上一般细胞中含有很多条染色体是每一个都整合么还是整合一个上?谢如何用标记基因检测目的基因导入载体宿主细胞的DNA修复能切除病毒整合在宿主细胞上的基因吗目的基因须由载体导入受体细胞