搜狗做题网pcr退火时DNA为什么不结合
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/07/23 05:29:50
上下引物的Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度；内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.没有目的基因是因为1该基因确实不表达；2你的引物不特意,到NCBI的Prime
58C,如果是有模板的话,58C或再低一些都可以,其实退火温度不需要刻意去要求,一般的PCR,52-60C就可以全解决.
问题是你怎么知道要扩增哪个DNA片段呢?还有你要怎么纯化PCR用的目的DNA?用鸟枪打碎基因组后将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别转入不同的受体细胞,让供体细胞提供的DNA的所有片段分别在各
DNA的双链主要是靠氢键联系在一起.退火温度越高,断开氢键的热能越大,引物与模板越不易结合,反之,退火温度越低,越容易形成氢键,进行退火.所以当温度高时,只有碱基匹配程度高的,也就是模板与引物形成配对
不同的PCRMIX所设置的退火温度是不一样的,有的比最低Tm值低5℃,有的低3℃,请你参考你所买的PCRMIX的说明书,上面肯定有详细说明.一般PCR比最低Tm值低1-5℃,都没什么问题.RT-PCR
计算退火温度的方法：1.退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5（oroligo6）计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认
我在这里就不跟你用专业术语解释了,用专业术语解释你都能自己找到,我就用最简单的方式跟你说.首先,你要搞清楚什么叫做克隆.克隆,在分子生物上其实就是“无性繁殖”,可能我这么说欠妥,但是你就可以这么理解.
你做个退火温度的梯度吧!大部分的PCR都有这一功能!退火温度选择一个范围,如50-60度,PCR仪器在一排（12个孔）或一列（8个孔）中每个孔的温度都不同,你在相应的孔中放入待反应的PCR混合液（保证
可以直接用DNA模板,只要DNA模板质量够好.
你做的什么PCR?是real-time?EtBr染色的?可能性较大的是,1,非特异性结合,2,形成primerdimer先画个标准曲线吧再问：EB染色啊，目的条带是960BP，每次在500bp左右都会
RNA在外界容易降解,所以在体外用DNA.这样比较容易操作.
只有在结合后,复合物的分子构型发生变化,可以吸收488nm的光能,然后发出522nm光.不结合,没有分子构型变化,就不能吸收光能.
Tm指的是把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度.我们PCR时候,当然不能用Tm值来作为退火的温度.一般来说,退火温度比Tm值要低上5度左右.但是这个也不是绝对的.建议你如果说模板比较充足的话,做一个梯
TM值是在一定buffer盐浓度情况下计算出来的.你需要查一下你的PCR体系里buffer盐的浓度,然后找相应的TM值.不过TM值也是一个估算值,举个例子,以你的正向引物而说,TTACAAGATGGA
1、软件预算2、利用梯度PCR优化退火温度
从原理角度分析,在Tm值的温度下,引物只能1半与模板DNA结合,低几度就全结合上去了.PCR扩增时需要引物完全结合到模板上才行.
那是为了检测这个基因是否表达,而不是检测是否存在.只有表达的基因才会转录成RNA.
理论上退火温度越低越利于引物和模板结合,但是有时候就是这样的,低的退火做不出来,高的做出来,我也碰到过这样的情况.其实影响PCR扩增的因素远比我们知道的多得多.我的猜测是这样的,可能刚好在这段引物或者
计算退火温度的方法：1.退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5（oroligo6）计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认
D嘛,没有引物,怎么进行PCR啊!