设计的兼并引物有的个体能p出来有的p不出来是为什么?

引物的设计一般要考虑以下几个问题：1.长度,至少要16bp,通常为18-30bp2.解链温度（Tm值）3.避免引物内部或引物之间存在互补序列（3个碱基）,从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的

请用primerexpress设计就行.你想去找非常保守的区域设计引物?可以,那你把这个物种的所有亚种的此段DNA序列做一个保守型分析就行.一般来说clustalX就可以了.再问：ClustalX排列

不用那么复杂网上那都是扯淡的主要是这么几点注意的：1.碱基组成,GC的含量2.引物长度3.不能有反向重复和自身互补序列4.Tm值5.3端最好为G或C等等设计时最好用软件弄一下不用面面俱到没有太大问题就

实际pcr的退火温度一般都是从55℃开始的,有杂带退火温度就提高一点,目的带比较微弱退火温度就降低一点,不用管那个引物单子上的温度,那样太麻烦,有的实验室一天做几百个样品的pcr,如果个个要看引物单子

关键就是这个引物的设计,如果你能设计好并且成功RT-PCR,那就没问题了.

这样就P不出来的啊要换模板的必须要比目的基因要长再问：谢谢。只能重新设计了。

把其中的一个引物的长度增加,让两个引物的Tm值接近一些好了.再问：那么二聚体和发卡结构的影响大么？再答：发卡结构我一般不考虑。二聚体的话，如果两个引物之间互补的序列不是很多的话，影响也不大。

引物可以通过一些软件设计,比如primer5,但是还需要注意一些细节问题.比如1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计.DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的.在NCBI上搜索不同物种的同

如果你测定的基因序列未知,可以用同源基因或者别的物种的同类基因序列来设计引物,进行PCR,看看是否能够扩增出产物,并对产物进行确认,判断扩增的特异性.如果确认无误,就可以进行荧光定量PCR.再问：我想

您应该使用巢式PCR来做这个实验.无论您是先提RNA再做反转录,还是直接从DNA中获得基因,考虑到模板的复杂性,都应当使用巢式PCR.建议您先从目的基因的上下游设计一段引物,即外引物,再根据目的基因上

要先在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed网址查询有关序列,再在PrimerPremier5软件中进行引物设计,主要要注意以下几个方面：①引物长度一般引物长度为18~3

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段

根据mRNA（真核的）设计的引物,一般如果用DNA做模板的话,那么会出现的情况会是以下几种.一是能扩增出条带,但目标条带比你要的条带要大,因为你会连同内含子一同扩增出来,所以片段会偏大.二是什么都扩增

跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.

一般使用primer5就挺好,不知道你是扩基因还是启动子,基因是否是已知.PCR引物设计原理:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关

找与此物种亲缘关系比较近的物种,将它们的核苷酸序列找出来,然后比对寻找高度同源的区域,引物就设在同源的位置　　简并引物是指用来编码一段短肽序列的不同碱基序列的混合物.主要用来同源克隆未知的基因,或用来

不用太纠结,有点儿具体也是可以的,一般都能P出来.再问：很多mRNA选择设计不同长度的引物，没有一对是无found显示的，真的很让人纠结；请问文献上的引物有的也是这样吗，不完美，但能扩出来，不会影响q

这个问题很简单,扩增序列应该称为目的基因,目的基因一般都上万bp,从两头开始当然不合适.PCR扩增只能扩增出上下游引物之间的序列,因为只有引物之间的DNA双链是解链状态的.你的问题说明你对基础知识掌握

我觉得不用吧计算Tm和退火不是算的双链部分的嘛不用计算附加碱基,如果要调整PCR的特异性,只是提高退火温度就好了,这个提高不是以附加碱基为基础的.克隆实验倒是无所谓,如果你是要在附加碱基中加入一个小T

如果引物序列,PCR体系,程序,以及所用的物种都和文献一样的话,可考虑两种情况：1.你所参考的文献真实度有待考量.2.你所提取的该物种DNA质量不好.需重新提纯.