蛋白条带变暗说明降解?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/19 01:29:01
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可能原因很多:1同源蛋白;2表位相似的杂带;3自身蛋白的修饰,糖基化,磷酸化等;4降解再问:那要怎么确认是什么原因造成的呢一共做了三次都出现这种情况再答:先看看旁边的带是多大。和你的同源蛋白大小类似吗
答:C-反应蛋白(CRP)是急性时相反应一个极灵敏的指标,血浆中CRP浓度在急性心肌梗死,创伤,感染,炎症,外科手术,肿瘤浸润时迅速显著升高,甚至可达正常值2000倍.CRP不是一个特异性检测指标,它
有可能消耗,蛋白质转入溶酶体消化细胞可以重吸收,通过泛素方式消耗.蛋白质在转入消化蛋白质的复合体中,需要泛素,在转入的过程中消化了ATP
深浅表示含量的多少宽度没啥表示吧是你泳道大小决定的
co-ip跑出来的两个蛋白,如果大小不一样,肯定是两条带的,跑WB前会让蛋白质变性,他们之间的结合不存在了跑出来粗是因为co-ip相当于一个纯化的过程,没有co-ip的样是检测一大堆蛋白里面你需要的蛋
erk1/2就表示erk1+erk2分子量分别42,44.也有的抗体只识别其中之一.一般情况下磷酸化不会导致蛋白分子量增加.具体看抗体说明书.CREB容易出两条带原因是CREB和另外一个蛋白同源性太高
一片亮,一般是样品处理或者配胶的时候不注意,混入了一些内切酶,或是电泳温度高,导致核酸降解,尤其是跑RNA电泳,很容易这样.建议用新胶,新TBC(TAC)重新跑一次,样品用醋酸铵重新纯化,电泳槽用缓冲
用这个方法复溶蛋白时很难完全溶解掉,样品处理很是个问题,应该是蛋白浓度不高.我做过类似的也是用这个方法,电泳出条带很浅甚至没有,很郁闷.再问:那你后来是怎么解决这个问题的呢?是bufferB溶解的时候
可能有几个原因:一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是
只用sephadex分离效果很差的,特别是分子量差异比较小的时候,基本没有什么分离效果.可以先过离子交换柱:阴离子交换和阳离子交换,这样能除掉很多的蛋白,在过sephadex.
泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的主要途径,参与细胞内80%以上蛋白质的降解.您好,答题不易如有帮助请采纳,谢谢!
因为这两种RNA的相对含量啊亲.那两条带一条在3.8kb,一条在2kb,都是rRNA的一部分,本来的相对含量大概就是1:2.另外,要达到这两条带1:2的比值比较难,只要最下面弥散的带不多质量就还可以,
目的蛋白加上标签蛋白的总分子量,当然会有误差.像GST这种标签很大的,有30kd左右.而FLAG,HIS等都比较小.
煮沸时间不够使得蛋白质变性不充分或者形成二聚体会导致实验效果不好,煮过头的情况我也没有遇到过(貌似还没有碰到人煮个5-10分钟还会煮成一小时的--|||),不过肯定的是变性已经充分.可以试一试,当然也
你是如何知道那条非目的条带也带有组氨酸标签的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂蛋白,也可能目的蛋白部分降解.要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到.可能试试再加一
泛素化是对特异的靶蛋白进行泛素修饰的过程.一些特殊的酶将细胞内的蛋白分类,从中选出靶蛋白分子.泛素化修饰涉及泛素激活酶E1、泛素结合酶E2和泛素连接酶E3的一系列反应:首先在ATP供能的情况下酶E1(
取决于蛋白降解的程度,如果不完全降解,出来的条带肯定会很暗;如果完全降解了,根本就没条带
5s是不是很亮的一片拖尾,如果是的话,就是降解了.如果你是做RT,不妨接着试一次,记得设好阴性和阳性对照;如果做Northern,那就重提吧.鸡肝RNAase多,提取时小心些.
请问蛋白marker染出来没?如果maker都没染出来,加上考马斯亮蓝染色液重复使用的话,八成是染液出问题了,我就遇到过这样的情况,重新配下染色液,过滤后再染胶试试看.(前提是Loadingbuffe
题目不太清楚.你的样品是什么?会不会不纯含有其他蛋白.染色方法对不对?如果所需验证的蛋白含量很少,银染分辨率比考然高.会不会跑胶跑过头了?