电泳条带很亮但CT值很高怎么办
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/24 18:13:13
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存在两种可能性,第一,引物设计错误,可以将引物和参考序列进行拼接后看看能不能顺利拼接,以及拼接之后的目的片段长度;第二,可能是非特异扩增,这个时侯如果确定引物位置没有问题,可以调整退火温度,以及PCR
核糖体RNA的含量最高,因此这三条带最明显,可是其实不只是这三条,可能你们实验条件有限,只看到3条了,我实验中有时候能看到很多条
有没有可能,有环状超螺旋DNA、开环DNA与变性的线型DNA三种空间构想,导致跑出3条带
中间的是RNA
你的电泳缓冲液和制胶缓冲液浓度不准或者脏了吧?换新的电泳缓冲液和制胶缓冲液试试.marker都出问题说明是你的胶的问题,或者电泳操作的问题.
可以照胶的时候去调节亮度,对比和γ射线,然后会清楚一些.同时,你优化下PCR扩增条件之类的,提高扩增效率.希望对你有帮助.望采纳.再问:感谢回答,我会试试调节亮度。请问,这跟电泳时使用的染色液有关系吗
不排除是预染Marker质量又问题再问:marker没有问题,实验室其他人做实验就没有问题。因为我是独立出来的,所以实验过程和仪器与他们不是很相同再答:那建议你在适当延长一下转膜的时间吧,三、四个小时
可能有几个原因:一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是
一个可能原因,DNA结合了蛋白质,所以跑不出去.加loadingbuffer后加热(90度以上)一下再上样试试.另外一个原因,你的产物特别大(不一定是目标产物)再问:我做的是菌落PCR电泳检测结果,我
应该是DNA污染~你用DNase处理下RNA提取物再用EDTA终止DNase活性~在跑下看看~一般都是DNA污染~才会在那个位置~
你好!我也做western有一段时间了很高兴和你探讨下这个问题我觉得该现象很可能的原因是转膜过程中出问题了,即1、转膜后的mark非常歪的原因是胶、膜以及滤纸(三明治组合)之间气泡没赶干净导致的.2、
主带显著的情况下,很可能是引物聚合体.如果没有出现显著的你想要的主带,则是非特异扩增产物.第一种情况没事不用理会,第二种情况需要筛查模版中与引物的非特异性互补区,重新设计引物,或者升高退火温度试试.
粗细代表DNA在胶中的扩散程度.电泳时间越长,胶密度越小、温度越高、电泳电压越高,DNA片段越短,条带就越粗,反之越细.
用迁移率算迁移率=蛋白质分子的移动距离:前沿分子的移动距离迁移率(m),蛋白质分子量(M)lg(M)=-bm+k其中b和k为常数也就是说迁移率(m)与蛋白质分子量(M)的对数成反比实验中用已知蛋白质分
首先要看你的条带是否清晰,虽然亮度不够但是清晰度应该高,没有拖尾没有非特异条带和引物二聚体,如果以上都没有,仅仅是目标条带不够亮的话,我觉得你可以将25微升体积同比放大至50微升反应体系,相应的制胶的
出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2
我觉得主要是胶和电泳缓冲液的问题,Tris8.86.8浓度,pH是否正确.SDS的纯度可能也有关系.丙烯酰胺的浓度,交联度合适不合适.做胶的时候各种溶液是否加的正确,胶的浓度是否合适,电泳缓冲液的浓度
RNA在提取过程中和保存期间非常容易被RNA酶降解,提取过程得非常小心,保存期间也得加RNA酶抑制剂,不知道紫外分光光度计检测时含量和纯度如何,及时被降解,也应该有拖尾才对,可能是浓度太低,建议加大上
开始我以为是退火温度问题,但是你说做了两次,第一次没有条带,第二次有一条没有,这说明你加样有问题,还有你为什么要同一个cDNA要做六个PCR呢?还是lz说的不清楚?同样的条件同样的样品没理由会六条中只
对颜色较深的条带进行切胶,切胶之后加入TE溶液,4度过夜后进行PCR(用带GC夹子的),再进行DGGE电泳以确定是单一条带;确认之后再用不带GC夹子的引物进行PCR,之后克隆、测序、系统发育分析即可.