dd水配pcr体系

标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液10ul4种dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA0.2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L加双或三蒸水至10

PCR-RFLP是聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性分析的简称.是在PCR和DNA序列分析基础上产生的RFLP技术.该方法是通过PCR扩增一段DNA片段,然后再选择适当的限制性内切酶,消化PCR

在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择：普通PCR内参的大小没有多大要求,但rea

模板1-100ng引物1（10uM）0.1-0.5uM引物2（10uM）0.1-0.5uMdNTP(10mM)1mM聚合酶5-10U聚合酶缓冲液(10*)10倍稀释水补足所需体积

楼上说的挺有道理,一般pcr反应体系的大小根据扩增的目的来确定,如果扩增后的产物还要用于后续的实验的话就要加大反应体系,50ul或者小体系25多做几管；如果仅仅是为了检测目的条带的话就可以做小体系的如

生成很多体系

随机引物PCR如果是RAPD的话,是要用单引物的一般是10bp大小的,CG含量要高于60%.

根据各试剂的终浓度来确定自己添加量,至于究竟应该用多大的体系我认为要根据自己的情况来确定,常用的有20,25,50等体系.建议参考别人的文献,一般做基因克隆的文章都会写反应体系,每种试剂用量.

模板,引物,聚合酶,原料加温度循环的条件

加入DMSO利于减少DNA的二级结构,使G、C含量高的模板易于完全变性,在反应体系中加入DMSO使PCR产物直接测序更易进行.

不能,LoadingBuffer里有溴酚蓝,可终止有关酶促反应,特别是限制酶切反应,只能在点样是加入LoadingBuffer,观察电泳的进度.

我帮你BS一楼.问反应体系,他给黏贴PCR的概念.PCR反应体系,简单的说,就是PCR管子里所有东西的混合溶液,就是溶解有引物、模板DNA、游离碱基、Taq酶、甘油等等的水溶液.

首先要看你的条带是否清晰,虽然亮度不够但是清晰度应该高,没有拖尾没有非特异条带和引物二聚体,如果以上都没有,仅仅是目标条带不够亮的话,我觉得你可以将25微升体积同比放大至50微升反应体系,相应的制胶的

传统mRNA差异显示技术（DDRT-PCR）是根据绝大多数真核细胞mRNA3'端具有的多聚腺苷酸尾（polyA）结构,因此可用含oligo（dT）的寡聚核苷酸为引物将不同的mRNA反转录成cDNA.该

PCR体系就是指一定比例的PCR要素（水、引物、酶、镁、dNTP、模板）的混合物.常用的体系有10微升、20微升、25微升、50微升等.通常小体系用于检测、分析,而大体系用于回收PCR产物.但是要注意

这个比较简单,其实你买Taq中就有反应体系,其实这个体系都是公司的人大量实验做出来的,我们实验室现在用Takra的Taq酶,体系就按说明书加的,不过体系是50ul的,我们把所有都减半做了25ul体系就

从两条引物Tm看,退火温度大致在52~57℃左右.在这个范围内做下温度梯度.标准PCR体系就可以.ps：引物有些偏长.

典型程序：94℃,5min;(94℃,30s；55℃,30s；72℃,1min)x30；72℃,5min.典型体系：10Xbuffer（含Mg2+）,5ul；2.5mMdNTP,2ul；10uMpri

如果你的实验室对pcr反应体系已摸索很清楚,就不用换反应体系,没有扩出dna可能跟你的操作有关,你可以做个阳性对照,就可以知道是否是体系的问题,一般实验条件体系摸索的很清楚的实验室,体系一般不会有问题

在25ul的反应体系中配置,PCRBuffer(组成：50mMKCl,10mMTris-HCl,2.5mMMgCl2,pH8.3),200μMdNTPs(200μM是指25ul体系中的dNTPs的终浓