已知一段核苷酸序列如何设计引物进行pcr扩增-搜答案-搜狗做题网

根本上说是已知核苷酸序列.如果序列知道了,它在什么基因上也就知道了（可以通过BLAST搜索的）.PCR的过程是这样的,你首先需要化学合成两条短的单链DNA序列,叫引物（可以直接叫一些公司帮你合成）,这

从NCBI中下载基因的序列,再用DNASTAR进行比对,那是保守区域!

你先设计几条引物,然后上NCBI数据库BLAST一下（在外显子上设计比较好些）再问：我的想法是先将已知的序列与同源物种比对，以同源物种多出的区域设计上下游引物，可是这样得到的引物分值太低，怎么办再答：

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/194473617?report=genbank

我很奇怪,你写的序列怎么没有方向呢?哪端是3’端?哪端是5’端?如果开头那个部分是5’端的话,你的一对引物的序列分别为：5’—gaatgtacgtgccgc—3'5'—actagctacaatcc—3

把这段基因输入设计软件里,调节引物位置,使变性温度在94度,退火温度=Tm-（5到10度）延伸温度72度左右,满足这些条件基本就可以了,当然还要根据实际情况多次实验得到最佳引物.如果你要扩增整个的基因

好像用这个软件设计引物的很少吧,我一般都用PrimerPremier5,或者oligo7.这种专业软件很多专业论坛都有说明书下载,比如生物秀、丁香通、生物谷什么的.

引物设计原则：1、长度：15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性.2、G十c含量

在知道碱基总数的情况下,知道一种碱基含量,就可以知道相对应的碱基的含量,由此可以用碱基总数减去已知碱基数,之后所得结果为另外两种碱基的含量总数.由于碱基的配对性质,所以用减去的结果除以二就可以得到剩余

这问题都上百度知道来问了,你也是生物专业的研究生吧.PrimerPremier5这个软件设计引物用很不错的.

试试primer软件.

首先查道你的基因序列（NCBI搜）,第二查引物设计原则,第三下载个引物设计软件设计,简单好用的有primerpremier5.0,这些都能在网上搜到,软件用法也能搜到.

在NCBI中进行primerBLAST就可以了.

提出了一种改良的TDT加尾克隆基因5对于基因组测序已经连接载体的PCR是利用已知基因组DNA序列设计的特异引物和载体通用引物进行扩增

不是再答：对拓扑异构、长度、碱基比例排列、端处有要求。

PCR的目的是为了扩增目的基因小一点的基因可以直接合成但是大一点的基因就得用PCR扩增了引物是和目的基因的一端互补的单链DNADNN左边一个序列右边一个序列而且DNA的复制只能按照一个方向复制就是由3

直接设计只要包含了整个CDS区就可以再问：哦，那CDS和ORF是一样的吗，怎么查找基因的CDS区啊再答：恩差不多回事ORF是DNA上的CDS是mRNA上的看你模板用的是基因组DNA还是cDNA了反正就

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

我有一个关于primer5的使用技巧的文档,你需要的话可以给你,里面介绍很详细,其实引物设计都是很简单的,自己多试试就很简单了

那你就去找一段序列,在两边设计引物,在引物的5端挂上酶切位点序列,P完之后就能链接进去