如何确定PCR反应的循环数?

标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液10ul4种dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA0.2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L加双或三蒸水至10

PCR技术已经在生物学研究和临床医学检验领域中得到了广泛的应用,PCR技术也日臻完善.PCR技术操作简便,特异性强,敏感度极高,正因为敏感度高,很容易受其他因素的影响,因此要得到准确可靠的反应结果,需

这个你是想问什么呢?如何检测PCR结果?再问：就是在提取RNA之后，逆转录之后，得到了模板。先用两个Outer引物检测一下，这步的目的是什么？再答：Outer引物检测，你是做巢式PCR吗？如果是检测模

一般情况下,循环30次产生的基因片段就够用了,在进行下去酶的活性可能也不会太好

影响PCR的主要因素PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA,然后才进行自动热循环,最后进行产物鉴定与分析.引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行,临床应用只需购买PCR

用PH控制器控制,我这里有份资料.可以发给你,留个邮箱给我.发私信给我,直接回复估计会被屏蔽.再问：649087466

是反转录PCR么?如果是realtime的话应该可以确定是否到平台期吧?以参考文献来回答也是可以的.关键你要明白对方为什么问这件事.如果没有任何迹象表明你的实验结果不能很好支持你的结论的话,是不应该吸

引物的设计：引物的设计不好可能产生非特异,造成假阳性.聚合酶：酶是影响PCR的关键,酶的失活造成PCR的失败,不同的酶扩增的片段也有差异.其次就是PCR反应体系,不现成份的尝试对PCR也造成影响.例如

第一步变性95度3分钟然后开始循环完了72度10分钟然后hold在16度就可以了

根据各试剂的终浓度来确定自己添加量,至于究竟应该用多大的体系我认为要根据自己的情况来确定,常用的有20,25,50等体系.建议参考别人的文献,一般做基因克隆的文章都会写反应体系,每种试剂用量.

这个是预变性,让DNA双链充分解离,然后第一次退火过程时候引物可以尽量多的结合到模版上面

（本文节选自“中学生物教学”2007年第4期）在选择的变性温度下,DNA分子越长,两条链完全分开所需的时间也越长.如果变性温度过低或时间太短,模板DNA中往往只有富含AT的区域被变性.在PCR的第一个

1、补水量：水在循环过程中,除了蒸发损失和维持一定的浓缩倍数而排掉一定的污水外,还有部分因空气流由冷却塔顶逸出带走的水损失,管道渗漏的水损失等,因此补水量为：补水量=蒸发损失+风吹损失+排污水损失+渗

先用几个循环把退火温度降下来然后再固定那个温度跑20个循环呗再问：你这是降落PCR吧？再答：是要不同的管子放一起做梯度？循环数和普通的一样啊

这种题目用半反应来确定As2O3+12H++12e-=2AsH3+3H2OZn-2e-=Zn2+*6As2O3+6Zn+6H2SO4=2AsH3+6ZnSO4+3H2O所以填H2O再问：半反应是什么如

首先要看你的条带是否清晰,虽然亮度不够但是清晰度应该高,没有拖尾没有非特异条带和引物二聚体,如果以上都没有,仅仅是目标条带不够亮的话,我觉得你可以将25微升体积同比放大至50微升反应体系,相应的制胶的

这个比较简单,其实你买Taq中就有反应体系,其实这个体系都是公司的人大量实验做出来的,我们实验室现在用Takra的Taq酶,体系就按说明书加的,不过体系是50ul的,我们把所有都减半做了25ul体系就

从两条引物Tm看,退火温度大致在52~57℃左右.在这个范围内做下温度梯度.标准PCR体系就可以.ps：引物有些偏长.

dNTP,含镁离子的PCRbuffer,上游引物,下游引物,taq酶,模板DNA.至于浓度,实际上说明书上都写着有,市售的taq聚合酶都带有10X的含镁离子的PCRbuffer,这个使用时稀释10倍就

PCR反应条件为温度、时间和循环次数.　　温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三温度点.在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90～95℃变性,再迅速冷却至4060℃,引物退