如何确定PCR中的退火温度和延伸时间
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/18 12:35:07
![如何确定PCR中的退火温度和延伸时间](/uploads/image/f/3526378-34-8.jpg?t=%E5%A6%82%E4%BD%95%E7%A1%AE%E5%AE%9APCR%E4%B8%AD%E7%9A%84%E9%80%80%E7%81%AB%E6%B8%A9%E5%BA%A6%E5%92%8C%E5%BB%B6%E4%BC%B8%E6%97%B6%E9%97%B4)
58C,如果是有模板的话,58C或再低一些都可以,其实退火温度不需要刻意去要求,一般的PCR,52-60C就可以全解决.
这篇文章有详细描述:http://www.springerlink.com/content/h083177466217382/引物OY1(AATAACTTTTCGAATCGCAT)OY2(AAGACT
在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,同时还要足够高,以减少非特异性结合.合理的退火温度从55℃到70℃.退火温度一般设定比引物的Tm低5℃.详细的还是看看下面这个网站希望能帮到
退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素.引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度.引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低.虽然降低退火温度可能增加扩增产量,
退火温度基本和引物有关,如果产物特异性不好,可以适当提高退火温度.循环次数是你自己定的,如果模板量低(产物量少)就多循环几圈,不过最好别超过35个,里边的成分都耗损的差不多了.再循环也没大用了.
不同的PCRMIX所设置的退火温度是不一样的,有的比最低Tm值低5℃,有的低3℃,请你参考你所买的PCRMIX的说明书,上面肯定有详细说明.一般PCR比最低Tm值低1-5℃,都没什么问题.RT-PCR
荧光定量PCR和半定量RT-PCR都可以用来检测基因的表达量的,但二者检测的东西多少有些不同.荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入可以和双链DNA特异性结合的荧光染料(sybrgreen)或者和目的
计算退火温度的方法:1.退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8)只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5(oroligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认
分别摸索实验条件测定,根据DNA电泳判断不过其实在做PCR的时候,根据合成的引物中的GC含量可以用公式计算出退火温度,一般比GC计算出的公式低5度比较合适
你做个退火温度的梯度吧!大部分的PCR都有这一功能!退火温度选择一个范围,如50-60度,PCR仪器在一排(12个孔)或一列(8个孔)中每个孔的温度都不同,你在相应的孔中放入待反应的PCR混合液(保证
唉,这种题就是中国特色,完全理论脱离实际.\x0dPCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR.其中,模板的GC含量、模板的组成(单一模板还是cDNA还是全基因组DNA还
TM值是在一定buffer盐浓度情况下计算出来的.你需要查一下你的PCR体系里buffer盐的浓度,然后找相应的TM值.不过TM值也是一个估算值,举个例子,以你的正向引物而说,TTACAAGATGGA
软件终归是软件,一个PCR体系的具体反应条件不通过实际运行是无法得知最佳退火温度的.建议你做一个梯度PCR摸索一下最佳退火温度.
1、软件预算2、利用梯度PCR优化退火温度
博凌科为-为你上下游温度很接近啊,45度,上下5度,0.2每个梯度.或者直接用47度P
一般用55°,不行的话用58°,再不行的话就设置从58-55的touchdown
引物的另一个重要参数是熔解温度(Tm).这是当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的.在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,同时还
说影响得看情况,退火温度太高肯定会影响引物的结合效率的.但是,实际上,好的引物一般是上下游引物的退火温度比较接近.有时候,我们可能会通过牺牲特异性的手段(当GC含量过高时,减少引物长度)来平衡两条引物
一般认为Tm-5度.但是要看你的Tm计算方法,不同公司合成的引物得出的Tm都不一样,你可以做个梯度PCR看看最适退火温度,以后就有经验了.
计算退火温度的方法:1.退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8)只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5(oroligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认