搜狗做题网做RT-PCR都需要哪些试剂耗材
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/07/24 14:04:10
先将组织剪碎,用RNA抑制酶保存,然后用三氯甲烷和异丙醇萃取,再分别用百分之七十五和百分之百的酒精洗脱,放入离心机内离心,提取上清液,加入WEGF的引物,再次离心,将混合液放入PCR仪中跑个15个循环
RT可能含义：reversetranscribe是逆转录,那么相应pcr应该是由rna凡转录cdna过程realtime实时定量那么就是荧光定量pcr了
用灰度分析软件统计,譬如Bio-rad的蛋白凝胶分析软件Quantity_One_v462
博凌科为-为你你这样解决不了问题.像你现在使用的2stepPCR不是用来解决上下游引物退火温度不一致的,而是用来解决引物不完全配对的情况的,比如克隆基因使用的引物因为和存在游离的内切酶位点,所以不能完
模板使用量（要让各样本调到类似的浓度,一般用内参引物调）,扩增循环数（一定不能到平台期）
说一下自己做实验时候用到的东西,血液提取mRNA还是采用试剂盒来提取,手工法极不推荐,但是试剂盒还是蛮贵的,可以问一下天根公司,价格还算可意,效果也不错.逆转录过程可以用Fermentas一款逆转录试
需要购买的做pcr扩增用的试剂:PCRmix,或者酶,dntp等,电泳的试剂：胶,buffer,核酸染料,marker.如果做荧光定量或者测序,需要荧光修饰的引物,还得合成.耗材:pcr板,吸头,pc
差不多吧,只要把DNA提取出来,照样做PCR
扩增在RNA上的序列：看有没有或者定量基因表达,还有就是用来克隆.
对这个是必须的.再问：那每次做的标准曲线的差异怎么去评价呢？差异在什么范围内可以呢？谢谢再答：必须的每次都做做标准！
首先,RT不是证明RNA有无表达的很好方法,RT批不出来会有很多原因,并不仅仅是没有模板.建议你做northern.做RT需要1,很干净整洁的实验环境,RNA提取对操作环境的要求很高.2,电动组织分散
热启动PCRTouch-downPCRRT-PCR兼并引物PCR巢氏PCR反向PCR不对称PCR原位PCR连接酶链反应RACE-PCRAFLP免疫-PCR(immuno-PCR)MSP甲基化特异PCR
是做RT－PCR吧?一般来说需要反转录酶、Taq酶,dNTP,缓冲液、引物和各种离子等.
我也做得RT-PCR,是提取某物种中未测序的一段基因.是用近缘物种基因进行比对,得到保守序列设计引物,再提取总RNA,RT-PCR得到目的基因的片段再问：我需要检测的分子，在nucleotide里找不
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要二价Mg离子).
TOYOBO的KOD酶做长片段PCR保真性很好,而且价钱比PS便宜些.
反转录PCR和普通PCR没区别,只要你的cDNA可以,53或54都行,用TAKARA的EXTAQ的话可以94度4min之后94度30秒,53度30秒,72度1分钟,循环35-39吧,72度10分钟.其
建议你先找一现成的DNA模板及相应的引物,然后做PCR,如果做出来了说明PCR体系没有问题.那问题就可能是出在反转录上了,RNA提取好之后可以跑个电泳或者检测OD值,以确认RNA提取是否成功.另外,检
如果是SYBRGreen,需要PCR试剂（最好是master试剂,含荧光染料的）,加上引物和你的样本就可以了如果做Taqman,还有探针
dNTP,含镁离子的PCRbuffer,上游引物,下游引物,taq酶,模板DNA.至于浓度,实际上说明书上都写着有,市售的taq聚合酶都带有10X的含镁离子的PCRbuffer,这个使用时稀释10倍就