做Q-PCR时,为什么ct值大于30多不好

看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?再问：不知道，我是个新手什么都不懂再答：那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来

发布时间:2012-3-311:50:01点击:1163在CT室日常工作中,有普通CT扫描和CT增强扫描两种,普通CT扫描是指不用造影增强或造影的普通扫描即CT平扫.很多患者对此感到疑惑不解,为什么在

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致.如果加样量是一致的,而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题.理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样.如果你能肯定加样

阈值和基线的设置肯定会影响Ct值,你可以采用每次反应完后软件自己选定的阈值.你也可以手动调整,但是如果你是相同的模板,做不同反应,那你必须使两次实验的阈值和基线调到相同.使用相同的标准品,才能减小不同

1、临床上已经证实,恶性肿瘤的发生并不是局限性的,癌症是一个浑身性的疾病,pet-ct诊断肿瘤,最好做全身性的扫描,这样有利于综合评估全身情况,特别是肿瘤转移病灶的诊断；2、pet-ct检查可以准确的

理论上是越一致越好.如果有很大的差异,说明实验有较大的误差,或者样本有降解.

就是cyclethresholdvalue的standarddeviation(STD.DEV).你做realtime的时候同样的样品肯定有replicate或者triplicate的.这个指标就是检

通常情况下,我们认定为15到35CT比较合理,超过35个CT那么就算它没有扩增了,如果15之前起峰,那么就是模板浓度太高所引起的,如果发文章,那么建议你控制在15到35之间吧

仪器配套软件会直接给出来一个CT值,也可自己调节

请问你做RealTimePCR做几个循环的?40个吗?40个循环的话,CT值在30左右很正常的啊,CT值30的话大概是10000copies,说明模板含量低嘛,定量定量就是要CT值有大有小的才有比较嘛

加样误差,或者浓度本来就低再看下你设置的基线是否不对再问：都是先配好mix液，混匀后再分加至每个孔的，应该误差不会很大吧（出现Ct值的大多在20左右）再答：有没有看看扩增曲线是否正常？或者你的模板质量

△△Ct=△Ct(试验样品)—△Ct(基准样品)△Ct(试验样品)=Ct（试验样品,目的基因）—Ct（试验样品,内参基因）△Ct(基准样品)=Ct（基准样品,目的基因）—Ct（基准样品,内参基因）2－

不需要完全符合等差数列的.你说说看相关系数R2和扩增效率E的结果怎么样,之后再考虑调整体系和qPCR程序.

用内参的方式进行realtime定量是不需要考虑加样量和反转录效率的问题的,因为结果都是和内参比,和内参同多同少.realtime不准是很常见的事,rna降解、引物特异性差、模板太浓或太稀等等许多因素

人工的吧,不是要看溶解曲线的峰的?

看了你空间里的溶解曲线,你可以看到溶解峰的温度都很低,全在80以下,你扩出来的东西多半只是引物,你跑定量的时候有做NTC的孔吗,如果有做,可以对照NTC组和加了模板的组,溶解峰还是一样的话,那你扩出来

2-ΔΔCt法.定量的作用是比较两个或多个样本（前提是细胞数目要相等）基因表达量差异的,基因拷贝数/内参拷贝数只是一个样本的相对定量值.内参的作用只是消除样本间细胞数目的差异.

主要看你的CT值大约是多少,如果很大（大于40循环）那么可以判定结果没有问题,如果跟目的基因的CT一致或者为其他CT值那么判断为模板造成的气溶胶污染或者其他外缘DNA造成的污染.另外你阴性对照加的是水

博凌科为-为你1.反应循环数不够.一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环（如至45cycles）,但高于45个循环会增加过多的背景信号.2.检测荧光信号的步骤有误.一般SG法采用72℃延伸时

△Ct（n）=Ct目的基因（n）-Ct内参基因（n）；△△CT（n）=△Ct（n）-△Ct（1）；然后算出2-△△CT；标准差我是同一处理做了3个平行算出来的.没法下标,用括号处理,